Fluorestsentsmikroskoopia on muutnud meie võimet visualiseerida ja uurida bioloogilisi proove, võimaldades meil süveneda rakkude ja molekulide keerukasse maailma. Fluorestsentsmikroskoopia põhikomponent on valgusallikas, mida kasutatakse proovis fluorestseeruvate molekulide ergutamiseks. Aastate jooksul on kasutatud erinevaid valgusallikaid, millest igaühel on oma ainulaadsed omadused ja eelised.
1. Elavhõbedalamp
Kõrgsurve elavhõbedalamp, mille võimsus on vahemikus 50–200 vatti, on valmistatud kvartsklaasist ja on sfäärilise kujuga. Selle sees on teatud kogus elavhõbedat. Kui see töötab, tekib kahe elektroodi vahel tühjenemine, mille tagajärjel elavhõbe aurustub ja siserõhk keras suureneb kiiresti. See protsess võtab tavaliselt umbes 5 kuni 15 minutit.
Kõrgsurve elavhõbedalambi emissioon tuleneb elavhõbeda molekulide lagunemisest ja vähenemisest elektroodide tühjenemise ajal, mis põhjustab valguse footonite emissiooni.
See kiirgab tugevat ultraviolett- ja sinakasvioletset valgust, mistõttu sobib see põnevate erinevate fluorestseeruvate materjalide jaoks, mistõttu seda kasutatakse laialdaselt fluorestsentsmikroskoopias.
2. Ksenoonlambid
Teine fluorestsentsmikroskoopias sageli kasutatav valge valgusallikas on ksenoonlamp. Ksenoonlambid, nagu ka elavhõbedalambid, pakuvad laia lainepikkuste spektrit ultraviolettkiirgusest infrapunakiirguseni. Kuid need erinevad oma ergastusspektrite poolest.
Elavhõbeda lambid koondavad oma emissiooni peaaegu ultraviolettkiirguse, sinise ja rohelise piirkondadesse, mis tagab eredate fluorestseeruvate signaalide genereerimise, kuid on tugeva fototoksilisusega. Järelikult on HBO lambid tavaliselt reserveeritud fikseeritud proovide või nõrga fluorestsentskujutise jaoks. Seevastu ksenoonlambi allikatel on sujuvam ergastusprofiil, mis võimaldab võrrelda intensiivsust erinevatel lainepikkustel. See omadus on kasulik selliste rakenduste jaoks nagu kaltsiumioonide kontsentratsiooni mõõtmine. Ksenoonlampidel on tugev ergastus ka infrapuna-lähedases vahemikus, eriti lainepikkusel 800–1000 nm.
XBO-lampidel on HBO-lampide ees järgmised eelised:
① Ühtlasem spektri intensiivsus
② Tugevam spektri intensiivsus infrapuna- ja keskmise infrapuna piirkonnas
③ Suurem energiaväljund, mis hõlbustab objektiivi avani jõudmist.
3. LED-id
Viimastel aastatel on fluorestsentsmikroskoopia valgusallikate valdkonnas esile kerkinud uus kandidaat: LED-id. LED-ide eeliseks on kiire sisse-välja lülitamine millisekundites, vähendades proovi särituse aegu ja pikendades õrnade proovide eluiga. Lisaks näitab LED-valgus kiiret ja täpset lagunemist, mis vähendab märkimisväärselt fototoksilisust pikaajaliste elusrakkude katsete ajal.
Võrreldes valge valgusallikaga kiirgavad LED-id tavaliselt kitsamas ergastusspektris. Siiski on saadaval mitu LED-riba, mis võimaldab mitmekülgseid mitmevärvilisi fluorestsentsrakendusi, muutes LED-id üha populaarsemaks valikuks kaasaegsetes fluorestsentsmikroskoopia seadistustes.
4. Lasers valgusallikas
Laservalgusallikad on väga monokromaatilised ja suunatavad, mistõttu on need ideaalsed kõrge eraldusvõimega mikroskoopia jaoks, sealhulgas ülieraldusvõimega tehnikate jaoks, nagu STED (stimuleeritud emissiooni kahanemine) ja PALM (fotoaktiveeritud lokaliseerimismikroskoopia). Laservalgus valitakse tavaliselt nii, et see sobiks sihtfluorofoori jaoks vajaliku spetsiifilise ergastuse lainepikkusega, tagades fluorestsentsi ergastuse kõrge selektiivsuse ja täpsuse.
Fluorestsentsmikroskoobi valgusallika valik sõltub konkreetsetest katsenõuetest ja proovi omadustest. Kui vajate abi, võtke meiega julgelt ühendust
Postitusaeg: 13. september 2023